血球計數(shù)板

，是指—種常見的生物學(xué)工具。用以對人體內(nèi)紅、白細(xì)胞進(jìn)行顯微計數(shù)，也常用于計算一些細(xì)菌、真菌、酵母菌等微生物的數(shù)量。是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有四個凹槽，構(gòu)成三個平臺。中間的較寬平臺被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各刻有一小方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分九個大格，的一大格作為計數(shù)用，稱為計數(shù)區(qū)。

計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。

注意事項：

1.鏡檢計數(shù)室。因前一次清洗不到位，或者保存過程中存在污染，更或者因操作不當(dāng)導(dǎo)致的計數(shù)室存在劃痕，若不及時清洗或更換，則會對后期實驗計數(shù)產(chǎn)生極大影響。所以，在每次使用血球計數(shù)板之前都需要加一步鏡檢計數(shù)室，如若在鏡檢時發(fā)現(xiàn)計數(shù)室有污物，則需按要求清洗并吹干后再進(jìn)行實驗。

2. 搖勻后取液。在吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，需輕輕震蕩試管，使菌體分布均勻，防止聚沉淀，從而提高計數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性。

3. 先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后，應(yīng)先在血球計數(shù)板上蓋上血蓋片，再用滴管吸取少許菌懸液，從計數(shù)區(qū)中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液，利用液體的表面張力一次性充滿計數(shù)區(qū)。若先加菌液再覆蓋血蓋片，則容易因為菌液加入過多，而導(dǎo)致血蓋片未與血球計數(shù)板支持柱接觸，血蓋片浮于菌液上方而導(dǎo)致計數(shù)偏大，同時會因為有氣泡產(chǎn)生而導(dǎo)致計數(shù)偏小。

4. 靜置片刻再計數(shù)。靜置5 min，待菌懸液不再漂浮流動，酵母菌全部沉降后再將血球計數(shù)板放到顯微鏡下進(jìn)行計數(shù)。先在低倍鏡下找到需要觀察計數(shù)的大方格及中方格，將中方格移到視野，然后撥動轉(zhuǎn)換器移至高倍鏡進(jìn)行計數(shù)。

5. 高倍鏡下調(diào)亮度。低倍鏡下，用平面鏡和小光圈，可以清晰地看到血球計數(shù)板上的酵母菌。但是，撥動轉(zhuǎn)換器換到高倍鏡后，即使是用了平面鏡和小光圈，視野里往往還是白茫茫一片，什么都看不見，這時候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進(jìn)行遮光處理。因為活的酵母菌和培養(yǎng)液的折光率相近，所以要在高倍鏡下將視野調(diào)得暗一些。

6.掌握計數(shù)原則。一般選擇觀察的菌液濃度控制在每個小方格內(nèi)有4或5個菌體為宜，若其濃度太高，可適當(dāng)稀釋；并采用“計上不計下，計左不計右”的計數(shù)原則。