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（一）操作室厭氧環(huán)境形成：

1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;

2. 通電源開照明燈，開溫控儀，調(diào)節(jié)所需溫度;

3. 操作室內(nèi)放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示紙（封閉）;

4. 關緊取樣室內(nèi)外門，并抽真空校驗;

5. 操作室內(nèi)*次置換（氮氣置換）：

A. 把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊

B. 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥1，使手套鼓起，關閉閥門1，然后扎緊袋口;

6. 操作室第二次置換（氮氣置換）重復一次充氮過程，取樣室先抽真空，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。如此連續(xù)三次氮氣置換。

7. 操作室第四次置換（混合氣體置換）：

（混合氣體配比為N2 85%、H2 10%、CO2 5%）

A. 調(diào)換氣路打開混合氣閥3進氣，充氣時取樣室先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣;

B. 關掉混合氣體閥3，并打開閥5，使混合氣體經(jīng)過流量計，調(diào)整流量計，流量為每分鐘10ml左右;

C. 混合氣體重復2-3次轉換，經(jīng)過上述過程，基本形成厭氧環(huán)境。

8. 操作室內(nèi)打開粑粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后打開美蘭指示紙觀察其變況，不變?yōu)椴僮魇覂?nèi)達到厭氧環(huán)境;

9. 開紫外線滅菌燈，室內(nèi)進行滅菌處理，滅菌時間按具體實驗自定。

（二）菌種的置入和培養(yǎng)：

1. 檢查取樣室內(nèi)門并關緊;

2. 打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門;

3. 取樣室充氮置換三次過程：打開真空泵，先抽真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后人工打開氮氣閥2進氣，使指針回復零位，關掉閥2。第二次重復操作一次。第三次操作時，使真空度500ml汞柱（66kPa）以上停，然后打開閥4進混合氣，使指針回復零位，關掉閥4。取樣室充氮置換三次過程結束;

4. 如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù);

5. 取樣室外門開啟、關緊，再抽低真空度100ml汞柱（13kPa）檢驗;

6. 厭氧培養(yǎng)箱需要*連續(xù)使用的條件：

A. 每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示紙觀察，如不正常就必須重新?lián)Q氣;

B. 要*連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補進的氮氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證室內(nèi)厭氧狀態(tài)，補入混合氣流量選定為每分鐘10ml左右;

C. 連續(xù)培養(yǎng)運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。

D. 操作室內(nèi)溫度可任意選擇和控制。

7. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調(diào)整：調(diào)節(jié)減壓閥，使輸出壓力0.1Mpa左右。

 

厭氧培養(yǎng)箱的使用注意事項

1.儀器盡可能地安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方;

2.開機前應全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確使用方法;

3.培養(yǎng)物放入必須是在操作室內(nèi)達到厭氧環(huán)境后放入;

4.如發(fā)生故障（停氣等原因）操作室內(nèi)仍可保持10小時厭氧狀態(tài)（超過10小時則根據(jù)需要把培養(yǎng)物取出另作處理）;

5.經(jīng)常注意氣路有無漏氣現(xiàn)象;

6.調(diào)換氣瓶時，注意要扎緊氣管，避免流入含氧氣體。

7. 真空泵按要求使用，定期檢查加油。