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技術文章

如何選擇優(yōu)質合適的光源獲得好的熒光圖像

閱讀:46發(fā)布時間:2025-1-23

熒光光學顯微鏡是使用光波長的激發(fā)光直射被檢物件造成熒光開展鏡檢查的顯微鏡電子光學觀察技術性,已經100很多年歷史時間。在生物醫(yī)學工程行業(yè)應用廣泛,大部分試驗室都是有配置高檔或是基本的顯微鏡成像系統(tǒng),熒光光學顯微鏡用以科學研究細胞內化學物質的消化吸收、運送、化合物的分布范圍及市場定位等。細胞中有一些化學物質,如胡蘿卜素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些化學物質自身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染劑或熒光抗原上色后,經紫外線照射也可以發(fā)熒光,熒光光學顯微鏡便是對這類化合物開展定性和定量科學研究的專用工具之一。

620熒光.png

近些年,各種各樣新式熒光染劑及各種各樣系統(tǒng)化的熒光探針持續(xù)發(fā)生,比如:熒光原位雜交(fluorescent in situ hybridization,F(xiàn)ISH)有關檢測試劑盒,銷售市場上發(fā)生的探針就會有十數(shù)種之多,Vysis mFISH探針檢測試劑盒(FITC,CY5,TxR,DEAC,SP-Gold),Abbott-FISH探針檢測試劑盒(Spectrum Blue,Spectrum Aqua,Spectrum Green,Spectrum Gold,Spectrum Orange),Zytovision FISH(ZyBlue,DAPI,ZyGreen),Cytocell FISH探針檢測試劑盒,其染劑的譜線范疇都各有差別,如何開始配備適合自己的熒光光學顯微鏡以達到的熒光檢驗實際效果成為一個比較繁雜的難題。深圳市星辰光學儀器有限公司一直專注于為顧客給予定制化的熒光顯微鏡成像系統(tǒng)軟件,依據顧客的意見反饋和人們自己的工作實踐簡易總結一下怎么選擇適合自己的光源以得到高品質的熒光實際效果。

一.熒光光學顯微鏡簡略基本原理

熒光顯微鏡的基本上結構一般由普通顯微鏡加上一些如熒光光源、激發(fā)濾片、兩色束分離設備及阻隔濾片等附近的前提下構成。與此同時選用的熒光光源一般為超高壓鈉燈,它可傳出各種各樣光波長的光,且每一種熒光化學物質都會出現(xiàn)一個造成熒光的激發(fā)光的波長,這時候要加置激發(fā)濾片,一般有紫外線、藍紫色、藍及翠綠色激發(fā)濾片,只需使一定光波長的激發(fā)光通過并照射到樣本上,并把別的光都消化吸收掉。

二.危害到熒光顯微鏡成像實際效果的要素

危害熒光顯微鏡成像的熒光要素許多,主要包含:熒光試品的制取,熒光光源的挑選,濾片輪盤的設計方案,熒光濾片的搭配對策(激發(fā)光濾片,發(fā)送光濾片,兩色鏡分光儀濾片,網絡帶寬挑選),顯微鏡物鏡類型,光學顯微鏡拍攝系統(tǒng)軟件的挑選等難題。熒光的激發(fā)、濾光、顯像、淬滅,熒光試驗的調節(jié)便是怎樣才能融洽好之上要素獲得比較好的成效,在其中危害到顯像實際效果的一個關鍵因素就是熒光光源。

三.熒光光學顯微鏡光源類型及詳細介紹

熒光顯微鏡的常見光源一般全是白光燈光源:高壓鈉燈,氙氣燈,金屬鹵素燈和LED白光燈光源及其高檔的LED單光波長光源。

1、汞燈

超高壓鈉燈(50-200W),這是用石英玻璃管制做,正中間呈球型,內充一定數(shù)目的汞,工作的時候由2個電級間充放電,造成汞揮發(fā),球內標準氣壓快速上升,當汞揮發(fā)時,可以達到50~70個標準大氣壓強力,這一全過程一般約需5~15min。超高壓鈉燈的閃光是電級間充放電使汞分子結構持續(xù)離解和復原情況下發(fā)送量子的結論。它發(fā)送很弱的紫外線和藍紫光,足夠激發(fā)各種熒光化學物質,因而,為熒光光學顯微鏡廣泛選用。產品推薦:歐司朗50W,103W,200W汞燈,適用各種生產廠家高檔熒光光學顯微鏡;一般200鐘頭使用壽命。

2、氙氣燈

氙燈和汞燈作為白光源,都可以給予從紫外光到近紅外光譜儀一系列光波長的光,但他們卻擁有不一樣的激發(fā)光譜儀。汞燈集中化在近紫外線、高清藍光及其綠色光周邊,這類在值的高激發(fā)動能保證造成光亮的熒光數(shù)據信號,但光毒副作用卻較強。因而,HBO用于對固定不動試品或弱熒光顯像。相比而言,氙氣燈光源的激發(fā)較為輕緩,能夠適用于不一樣光波長間抗壓強度的較為,比如用以鈣離子濃度精確測量等。氙氣燈的強激發(fā)在近紅外光譜儀800-1000nm。

XBO較HBO的特性:

1)光譜儀抗壓強度更勻稱

2)在紅外線及中紅外仍有光譜儀抗壓強度

3)動能更加容易抵達目鏡后直徑

該類商品:XBO75W,100W氙氣燈;使用壽命一般400鐘頭,1200鐘頭

3、金屬鹵素燈

現(xiàn)階段各種光學顯微鏡品牌廣泛應用的一種光源,它和汞燈的激發(fā)光譜儀很像,但它和光學顯微鏡以光纖線相接,能排熱,使用壽命更久。光纖線從光源連在光學顯微鏡上,能夠大量的降低光造成的熱量。金屬鹵素燈對活細胞成像的另一個優(yōu)點是內嵌抗壓強度設計方案設備,能夠非常容易調整激發(fā)光。還可以根據挑選直接連接得到更快的激發(fā)實際效果。比如:EXCELITAS企業(yè)X-cite光源,120W,適用各種生產廠家高檔熒光光學顯微鏡;使用壽命2000鐘頭之上。價格實惠,發(fā)貨速度快。


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